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三一造血CIK 細(xì)胞高效擴(kuò)增試劑盒(CT-009)產(chǎn)品介紹

 更新時(shí)間:2024-03-12 點(diǎn)擊量:686

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷性細(xì)胞(CIK 細(xì)胞)是一個(gè)異質(zhì)細(xì)胞群,包含 CD3+CD56+NK 樣 T 細(xì)胞和CD3+CD8+細(xì)胞毒性殺傷作用 T 細(xì)胞,具有殺傷腫瘤具有 MHC 限制性和非 MHC 限制性的特點(diǎn), CIK 細(xì)胞對(duì)各種腫瘤尤其是對(duì)低表達(dá) MHC Ⅰ Ⅱ分子更有效。 本試劑盒可以從單個(gè)核細(xì)胞(MNC)在體外高效擴(kuò)增成 CIK 細(xì)胞,為免疫學(xué)研究提供了一個(gè)有力工具。

產(chǎn)品特點(diǎn):

· 成份明確,無(wú)異源成份

· 無(wú)菌,無(wú)支原體,低內(nèi)毒素

· 同時(shí)適用于膠血與外周血

· 14天培養(yǎng)后,細(xì)胞活率在90%以上wan全無(wú)血清培養(yǎng),使用更安全

· 殺傷活力強(qiáng),主要成分為NK樣T細(xì)胞及細(xì)胞毒性T細(xì)胞

操作方法:

一、血漿的提取與保存

1.將取到的 50-60mL 外周血置于 50mL 離心管中,室溫下 650g,離心 15min;

2.取上層黃色血漿部分于新的 50mL 離心管中(下層為血液細(xì)胞成分,用于后續(xù)單個(gè)核細(xì)胞的提?。?/p>

3.將血漿置于 56°C 水浴鍋中滅活 30min;

4.血漿滅活完畢后,可見(jiàn)血漿呈現(xiàn)渾濁狀,900g,離心 10min;

5.取上清,于 4°C 保存待用。

二、單個(gè)核細(xì)胞的提取

1.取血漿提取步驟的下層紅色細(xì)胞沉淀,加入生理鹽水或 PBS 至原體積;

2.取 2 支 50mL 離心管,分別加入 15mL 淋巴細(xì)胞分離液,并將 1 步驟中的稀釋血液分別緩緩鋪加到淋巴細(xì)胞分離液的上層;

3.室溫下,800g 離心 20min(升速 1-5,無(wú)閘減速);

4.離心后,離心管中樣品由上到下分為 4 層:血漿層-白膜層-人淋巴細(xì)胞分離液層-紅細(xì)胞與粒細(xì)胞的沉淀。分別小心吸取白膜層及其以下約一半的液體于新的離心管中,并加入生理鹽水或PBS 至 40mL 體積,混勻,300g 離心 10min;

5.棄上清,沉淀再次用 40mL 的生理鹽水或 PBS 重懸,300g 離心 10min;

6.棄上清,沉淀用少許 CIK 細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基重懸,合并,取部分細(xì)胞懸液計(jì)數(shù),備用。

三、單個(gè)核細(xì)胞接種與補(bǔ)液

1.第0天,配制50mL CIK 細(xì)胞wan全培養(yǎng)基:CIK 細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基 45mL,10%已熱滅活的自體血漿(5mL),CIK-I 100μL,CIK-II 100μL 以及終濃度為 1000IU/mL 的 IL-2。將制備好的單個(gè)核細(xì)胞(MNC)按 1.5M cells/mL 的細(xì)胞密度接種于 50mL 已配制好的 CIK 細(xì)胞wan全培養(yǎng)基中,混合均勻后轉(zhuǎn)移至 T75 瓶中,而后將 T75 瓶轉(zhuǎn)移至 5%二氧化碳培養(yǎng)箱 37°C 培養(yǎng);

2.第 3 天(3×24h),補(bǔ)加 CIK 細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基 95mL,5%已熱滅活的自體血漿(5mL)以及 IL-2(IL-2 終濃度為 1000IU/mL),轉(zhuǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)袋,此時(shí)培養(yǎng)袋含 150mL 培養(yǎng)基;

3.第 5 天,補(bǔ)加 CIK 細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基 150mL,1%已熱滅活的自體血漿 1.5mL 以及 IL-2(IL-2終濃度為 1000IU/mL),此時(shí)袋子含 300mL 培養(yǎng)液;

4.第 7 天,補(bǔ)加 CIK 細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基 300mL,剩余的所有自體熱滅活血漿以及 IL-2(IL-2 終濃度為 1000IU/mL),然后分成兩袋,此時(shí)每個(gè)袋子約含 300mL 培養(yǎng)液;

5.第 9 天,分別往每個(gè)培養(yǎng)袋補(bǔ)加 CIK 細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基 300mL 以及 IL-2(IL-2 終濃度為1000IU/mL),此時(shí)每個(gè)袋子約含 600mL 培養(yǎng)液;

6.第 11 天,分別往每個(gè)培養(yǎng)袋補(bǔ)加剩余 CIK 細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基以及 IL-2(IL-2 終濃度為1000IU/mL),此時(shí)每個(gè)袋子約含 1000mL 培養(yǎng)液;

7.第 13-14 天,收獲 CIK 細(xì)胞。

產(chǎn)品選購(gòu):

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

CT-009

CIK   細(xì)胞高效擴(kuò)增試劑盒

2L/



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