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怎么預(yù)防細胞污染?

 更新時間:2024-09-13 點擊量:527

一、前言

經(jīng)常做實驗的小伙伴都知道,從事細胞培養(yǎng)工作時都有可能面臨細胞受到污染的境況。對于細胞的受污染問題,最為緊要的在于防范,因為一旦細胞受到污染,欲挽回已十分艱難,即便成功挽回,細胞的狀態(tài)亦會受損,進而對實驗結(jié)果造成影響。因此,讓我們首先探討一下如何有效地進行預(yù)防。

怎么預(yù)防細胞污染?

生物安全柜是細胞處理的主要場所,而培養(yǎng)箱是細胞生長的主要場所,所以細胞污染通常就發(fā)生在這兩個地方。那么在使用生物安全柜和培養(yǎng)箱時如何做好預(yù)防措施呢?

二、措施

1. 所有進入安全柜的東西都要盡可能保證無菌

如果實驗室條件允許,那直接購買商品化的試劑和耗材是最穩(wěn)妥的,他們的試劑和耗材一般只要是正品都可以保證無菌。如果試劑需要自己用干粉配制,那么在配制中需要嚴格按無菌操作進行。另外每次試劑配制量不宜過多,比如wan全培養(yǎng)基建議以一到兩周內(nèi)用完為宜。

試劑在分裝時可以考慮再用針頭式過濾器過濾一次,減少污染的可能性。如果所用移液器吸頭是散裝的,則注意在將吸頭裝入吸頭盒時需要帶手套,因為滅菌時無法完quan去除吸頭上可能粘附的油脂和其他雜質(zhì)。

2. 安全柜每次使用前需要紫外照射30min滅菌

安全柜需再通風(fēng)5min以上保證換氣到位。每次處理細胞前應(yīng)將實驗需要的各種試劑、耗材備齊,盡量減少細胞處理過程中的來回走動。安全柜內(nèi)的東西盡量擺放有序,具體可以根據(jù)個人使用習(xí)慣而定,如果你使用的是公用安全柜,則可能需要使用前臨時調(diào)整。

實驗過程中所有試劑不用時需要蓋上瓶蓋,瓶蓋打開時除了干凈的吸頭,其他任何東西都不要從瓶口的上方經(jīng)過。如果使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)細胞,則處理時不要長時間打開皿蓋。如果所用吸頭沒有濾芯,那在使用時注意不要將試劑倒吸入移液器,如果倒吸的是培養(yǎng)基,極易成為細菌生長的溫床。一把有菌的移液器可以輕松污染所有使用其處理過的細胞,所以一旦發(fā)生倒吸,要及時用酒精棉球擦去倒吸的試劑,有條件的建議使用帶濾芯的吸頭。

3. 使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)細胞,放入培養(yǎng)箱前搖勻時要輕柔

不要將培養(yǎng)基搖到皿蓋和皿身的間隙中,這樣在細胞生長時很容易污染。如果使用瓶蓋沒有氣孔的細胞瓶培養(yǎng)細胞,放入培養(yǎng)箱前需要將瓶蓋擰松半圈左右,保證瓶內(nèi)外可以進行氣體交換,注意不要擰太松,這樣在細胞生長時也很容易污染,有條件的建議選擇瓶蓋有氣孔的細胞瓶,這樣放入培養(yǎng)箱前直接擰緊瓶蓋即可。由于培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度和濕度很高,所以最好定期用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱消毒。培養(yǎng)箱里水槽中的水需要使用無菌水,不可以用自來水。

怎么預(yù)防細胞污染?

三、那么細胞如果還是不幸污染了又該怎么辦呢?

把細胞污染分為早期污染和晚期污染兩種情況。早期污染是細胞狀態(tài)變差,但依舊能保持生長,顯微鏡下未見明顯微生物或可見少量微生物。這種情況的話我們在換液時可以多用PBS洗幾次,然后加入適合的抗生素。早期污染只要發(fā)現(xiàn)及時,處理得當,救回來的可能性還是很大的。

晚期污染則是細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,細胞停止生長,顯微鏡下可見大量微生物。這時候建議大家及時清理掉相關(guān)細胞,以免污染其他細胞。在對安全柜和培養(yǎng)箱進行消毒后,再重新復(fù)蘇早批次的細胞。

細心的會發(fā)現(xiàn),新細胞收到后,不應(yīng)急于開展實驗,而應(yīng)該先小心培養(yǎng),凍存一到兩個批次的細胞后再開展實驗,這樣實驗過程中如果細胞出現(xiàn)問題,可以有凍存細胞保證實驗還能繼續(xù)進行。

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